脂肪乳注射液的粒度檢測及藥典標(biāo)準(zhǔn)

［摘要］分別采用動態(tài)光散射法( DLS) 、經(jīng)典光散射法、基于單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法( LO /SPOS) 與電阻法，對脂肪乳注射液的乳粒進行考察，主要檢查粒徑分布及顆粒濃度。結(jié)果表明經(jīng)典光散射法與動態(tài)光散射法( DLS) 測定乳粒的平均粒徑以及粒徑分布結(jié)果基本一致，LO /SPOS 測定大粒子(＞5μm) 的結(jié)果相較于電阻法(傳統(tǒng)計數(shù)器)更好，優(yōu)勢更加明顯。

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1. 概念

脂肪乳注射液又名脂肪乳注射液(C14～24)，是由注射用大豆油(14～24)個碳原子的脂肪酸構(gòu)成的長鏈甘油三酯) 經(jīng)注射用蛋黃卵磷脂乳化，并加注射用甘油制成的滅菌乳狀液體。為能量補充藥，為機體提供能量和必需脂肪酸，用于胃腸外營養(yǎng)補充能量及必需脂肪酸，預(yù)防和治療人體必需脂肪酸缺乏癥，也為經(jīng)口服途徑不能維持和恢復(fù)正常必需脂肪酸水平的患者提供必需脂肪酸。注射用脂肪乳是一種良好的藥物載體，具有增強藥物穩(wěn)定性，減少副反應(yīng)，具備一定靶向性等優(yōu)點，在臨床應(yīng)用和研究開發(fā)領(lǐng)域發(fā)展迅速。

乳粒大小和分布是脂肪乳注射液質(zhì)量控制的核心內(nèi)容，它和注射液的穩(wěn)定性、有效性和安全性密切相關(guān)。

2. 藥典標(biāo)準(zhǔn)

我國脂肪乳注射液現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)》1998年版 2 部第 6 冊(生化藥品第1分冊) (簡稱部頒標(biāo)準(zhǔn))和企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)(國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH13472008)。USP35版收載了脂肪乳注射液( lipid injectable emulsion)，是對所有乳劑的一個通用規(guī)定。在“乳粒”檢查項下，企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)與部頒標(biāo)準(zhǔn)一致，與USP35標(biāo)準(zhǔn)相比，差別較為明顯，尤其是在控制大粒子方面， 測定方法和限度都有明顯差異。國內(nèi)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)采用計數(shù)器方法，分別對大于1μm和5μm 顆粒進行控制; 而USP35則采用光阻法對大于5μm顆粒的重量百分比含量進行控制。

方法一：采用動態(tài)光散射或者米氏散射原理測試脂肪乳平均粒徑(MDD)，規(guī)定強度徑 Int-Weight不得超過500nm；

方法二：采用光阻法(Light Obscuration)測得PFAT5值：統(tǒng)計1.8μm-50μm的脂肪乳顆粒體積在油相體積中的比例。測試三次，PFAT5值不得超過0.05%。

3. 檢測方法

目前市場主流的乳粒分析儀主要有BECKMAN COULTER計數(shù)器、PSS380&780APS激光粒度測定儀以及MALVER N2000 激光粒度測定儀。

1）電阻法：BECKMAN COULTER計數(shù)器測定原理為電阻法。當(dāng)一個顆粒穿過小孔時，在感應(yīng)區(qū)中一個類似體積的電解液被該顆粒所置換。小孔所產(chǎn)生的通過電解液的電流流動的阻力就改變了，這種阻力上的改變以一個脈沖的形式測量。計數(shù)的脈沖數(shù)量與穿過小孔的顆粒的實際數(shù)量直接相關(guān)。因此可以通過脈沖數(shù)量計算通過小孔的粒子數(shù)。英國藥典丙泊酚脂肪乳注射液項下采用該方法。該法優(yōu)點是分辨率高測量速度快，重復(fù)性好，缺點是容易發(fā)生堵孔故障，需要根據(jù)測定粒子的大小更換小孔管等。

2）動態(tài)光散射：PSS 380 激 光 粒 度 測 定 儀 采 用 動 態(tài) 光 散 射 ( dynamic light scattering) 原理。測量的依據(jù)是粒子的布朗運動導(dǎo)致光強的波動，微小粒子懸浮在液體中會無規(guī)則地運動， 布朗運動的速度依賴于粒子的大小和媒體粘度，粒子越小，媒體粘度越小，布朗運動越快。光通過膠體時，粒子會將光散射， 在一定角度下可以檢測到光信號，所檢測到的信號是多個散射光子疊加后的結(jié)果。后通過光強波動變化和光強相關(guān)函數(shù)計算出粒徑及其分布。

3）光阻法：當(dāng)有一定微粒的液體流經(jīng)一狹長檢測區(qū)時，與檢測區(qū)垂直的入射光被微粒所阻擋，產(chǎn)生一定程度的遮光現(xiàn)象，從而投影在光電接收器件上的透射光強度會有所減弱，傳感器輸出的脈沖信號大小與阻擋微粒的截面積成正比，不同截面積的粒子產(chǎn)生不 同的輸出信號．經(jīng)計算機進行數(shù)據(jù)處理后。給出所測粒徑的分布結(jié)果。粒徑測量范圍可達2- 400 um。當(dāng)測量光源采用激光光源時．入射光強度會有所增加，可以提高檢測分辨率。

4）經(jīng)典光散射：MALVERN 2000激光粒度測定儀采用經(jīng)典光散射原理， 測量的依據(jù)是米氏散射理論和弗朗霍夫近似理論，建立在一定的理論和數(shù)學(xué)模型之上，測得的結(jié)果是按照光強信號與角度的函數(shù)關(guān)系推算得到的顆粒群體的相對粒徑分布。若乳粒中大于

5μm的乳粒確實存在但相對于整體來說含量很低的時候， 使用激光粒度測定儀可能因為無法得到有效的光強信號而誤以為沒有大粒子。該法測定結(jié)果受3個參數(shù)影響，分別是折射率，遮光度及吸收率。

4. 結(jié)論

目前市場基于單顆粒光傳感技術(shù)的光阻法( LO /SPOP) 測定大粒子具有明顯的優(yōu)勢，通過光學(xué)設(shè)備對不透光的粒子進行測定，可直接測定樣品，結(jié)果較為直接和直觀; 而電阻法需要添加電解質(zhì)，通過顆粒帶電荷的多少來判斷，并通過折算，因此相對來說較為復(fù)雜，而且電解質(zhì)可能會使乳粒聚集，測得的結(jié)果可能比光阻法高，從而影響判斷。

乳粒的大小與粒徑分布決定了脂肪乳注射液的物理穩(wěn)定性、臨床安全性和有效性， 是一項重要的質(zhì)控指標(biāo)， 通過本研究結(jié)果的探討希望能引起相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定和監(jiān)管部門的重視，增修訂相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，完善藥典附錄， 以真正能達到評價產(chǎn)品質(zhì)量的目的，并能促進相應(yīng)的生產(chǎn)和工藝改進， 提高該類產(chǎn)品的質(zhì)量水平。